岡崎のタンポポの雑種化と生理的機能
- 遺伝子解析に基づく継続的調査から -
岡崎高校スーパーサイエンス部 生物班
ABSTRUCT
We have researched dandelions in Okazaki and analyzed the types of dandelions by analyzing of genes and enzymes for 4 years, 2003-2006. As a result, we found that the hybridization is on the move among Taraxacum platycarpum Dahlst.,which is native species, T. laevigatum DC. and T. officinale Weber, which are naturalized species. And they are expanding the area of their habitat. Especially, the expansion of hybrid T. laevigatum DC. is rapid. So we think that hybrid T. laevigatum DC. will keep on crossing T. platycarpum Dahlst. and it will drive hybridization further.
While conducting the survey of dandelions by analyzing their genes and enzymes, we got interested in the factors of hybridization of dandelions. We consider that naturalized dandelions may have adapted to the environment of Japan by taking in the genes of T. platycarpum Dahlst. in the process and then acquiring some kind of physiological characteristics from T. playcarpum Dahlst. So in order to prove it, this year, we researched the summer dormancy(T. platycarpum Dahlst. has this characteristic but naturalized dandelions don7t have it). We counted the number of leaves and tried to find whether the fluctuation of leaves was related to some exothermal factors or not. As a result, we have found that summer dormancy can be affected by the highest temperature very much. And we have found the tendency that a hybrid T. laevigatum DC. is more likely to take in the characteristic of the summer dormancy by getting close to T. platycarpum Dahlst. than a hybrid T. officinale Weber
は じ め に
在来種であるニホンタンポポは郊外地域に,帰化種であるセイヨウタンポポやアカミタンポポは都市化の進んだ市街地に生育しているといわれてきた。タンポポという植物の認知度は高く,在来種と帰化種の判別が外総苞片の反り返りで簡単にできたため,都市化の度合いを測る環境指標生物として利用されてきた。
スーパーサイエンス部生物班では2003年度から4年間にわたり採取したタンポポのうち700個体以上について遺伝子解析(酵素多型解析と葉緑体DNA解析)を実施した。セイヨウタンポポは,調査開始の2003年度からすでに100%近い雑種率を示し,また,アカミタンポポでは雄核単為生殖個体(芝池ら,2002)の発見(岡崎高校,2004)や,ニホンタンポポとの雑種個体の増加やその分布域の拡大が認められた。これらは,愛知県名古屋市・刈谷市・豊橋市・渥美郡渥美町の4カ所の調査で,セイヨウタンポポの94.7%が雑種性個体であったが,アカミタンポポの雑種率は10%にも達していなかったという報告(渡邊,1997,abd)や,1996年と2001年に大阪府で行われたタンポポ調査で,セイヨウタンポポの雑種率は,90%以上であまり変化はなかったが,アカミタンポポの雑種率は34.6%から83.3%へ増加したという報告(渡邊ら,2002)とほぼ一致する。雑種化した個体は,真の帰化種とは外見上から区別はしにくく(岡崎高校,2005),在来種の生育環境にも侵入してきているので,環境指標生物としての信頼性は揺らいでいると言わざるを得ない。
帰化タンポポは,ニホンタンポポと雑種化することで有性生殖をおこなうニホンタンポポの遺伝子を取り込み,遺伝子の多様性が変化しない無性生殖の弱点を補っているのではないか。雑種化により,日本の環境に適応した生理的特性(具体的には夏季休眠性など)を獲得し,その勢力範囲の拡大を行っているのではないか。といった疑問が,4年間にわたり学校周辺のタンポポの遺伝子解析をすすめていく中でわいた。これらを検証するため,今年度は,遺伝子解析(酵素多型解析と葉緑体DNA解析)および夏季休眠性の調査をおこなった。
実 験 方 法
1.材料の採取

2003年度と2004年度には,愛知県岡崎市の岡崎高校周辺4km四方を調査地域として愛知県内の調査(渡邊,1998)に倣い,スーパーサイエンス部員20名で行った。昨年度より本校周辺を重点的に調査することと,調査およびその後の解析の効率化を図るために,調査範囲を2�匯擁�に縮小した(図1)。今年度も昨年と同様の範囲で調査を行った。10000分の1の地形図を用いて,調査範囲を8×8の計64枚のメッシュに分け,この250m四方の小枠ごとにニホンタンポポ,見かけのセイヨウタンポポ,見かけのアカミタンポポをそれぞれ採取した。タンポポの見かけの判別方法は外総苞片が上を向いているものをニホンタンポポとし,外総苞片が反り返り,痩果が黄褐色のものを見かけのセイヨウタンポポ,外総苞片が反り返り痩果が赤褐色のものを見かけのアカミタンポポとした。(野坂,芹沢,2002)。これらのうち頭花,花茎,痩果,葉を同時に採取し外総苞片の反り返りの角度を測定した。
2.核の遺伝子解析(アロザイム酵素多型解析)

酵素多型とは,活性部位以外のアミノ酸配列が少し異なっているために機能は同じではあるが分子量等が異なっていることをいう。アロザイム酵素多型解析は,DNAを直接調べるのではなく,種内に蓄積した酵素の変異を調べる解析方法であり,種内,種間の識別を行うことができる。この性質を利用して,タンポポの遺伝的な種を判別するのにGOT(グルタミン酸オキサロ酢酸アミノ基転移酵素)と6PG(6ホスホグルコン酸脱水素酵素)の2種類の酵素について調べた。
対立遺伝子a〜dでの違いによりゲル上に現れたバンドを図2に示した。GOTについては,帰化タンポポはdバンドのみ持つのに対し,ニホンタンポポはa,b,cいずれかのバンドを持つことから区別できる。また,dバンドとa,b,cいずれかのバンドをあわせ持つものを雑種タンポポとした。6PGでは,アカミタンポポのみが特異的なバンドを持っていることから区別できる。(渡邊ら,1997ab)
3.細胞質の遺伝子解析(葉緑体DNA解析)

葉緑体DNAの解析では葉緑体DNA上の運搬RNA遺伝子trnLとtrnF間の非翻訳領域(約500bp)は,挿入・欠如によりニホンタンポポに比べ帰化タンポポの方が約80bp短い。これを利用し,ニホンタンポポと帰化タンポポを判別できる。
4.調査方法

各種のタンポポ地図は,加重平均法(渡邊ら,1998)を用いて作成した。計算地点を250mメッシュの交点上に置き,各計算地点から半径500mの制限円内にある生育確認地点を抜き出す。ニホンの生育地点には0,帰化タンポポの生育地点には1の得点を与え,a1とおく。さらに計算地点と生育確認地点の水平距離d1の逆数で重み付けをし,a1の平均化を行う。この計算式から求まるXをその地点のポイントとし,ポイントごとに値に対応した色を与えていく。この方法は調査の際に生育確認地点の密度を高めなくても誤差の少ない,より正確な2種の生物の分布状態を表すことができる。昨年同様,地図の作成には本校の卒業生である古橋貞之氏が開発した「Mesh Worker」(岡崎高校,2004)を使用した。
5.生殖方法

生殖方法にはニホンタンポポ(2倍体)どうしの交雑での通常の有性生殖,帰化タンポポ(3倍体)が行う無性生殖(無融合生殖),帰化タンポポの花粉がニホンタンポポのめしべと受粉して起こる雑種形成(3倍体,4倍体),最近報告された(芝池ら,2002)交雑方法の雄核単為生殖がある。
6.夏季休眠性
ニホンタンポポは夏季に葉の枚数が減少して地下部のみとなり秋季になると再び地上部が現れる。この一連の変化を夏季休眠と呼ぶ。夏季休眠性を持っているのは在来種であるニホンタンポポであり帰化種であるセイヨウタンポポ,アカミタンポポは夏季休眠性を持っていない。そこで今回はニホンタンポポと真の帰化タンポポ,雑種性帰化の夏季休眠性の有無を調査した。
結 果
1.遺伝子解析

表1に,遺伝子と酵素の解析の結果得られたタンポポの真の種類ごとの個体数のデータを示した。
今年採取したセイヨウタンポポは全て雑種性個体であり,例年とほぼ同じ結果となった。アカミタンポポについては,62個体中37個体が雑種で,59.7%という高い雑種率となっていることがわかった。
表2に,2003年度から2006年度までの4年間分のセイヨウタンポポの雑種率,真のアカミタンポポの個体数,雑種のアカミタンポポの個体数,アカミタンポポの雑種率を示した。セイヨウタンポポの雑種率は毎年100%近く,雑種化がほぼ完了していることが伺える。一方,調査を開始した2003年頃から見てみると,アカミタンポポの雑種率は急激に増加していることが見てとれる。このことから,アカミタンポポに関しては,今まさに雑種化が進行している状況下であることがわかる。
2.タンポポ地図
「Mesh Worker」(岡崎高校,2004)を用いて,各種タンポポの採取地点,及びその注目するタンポポ間の採取地点の比をまとめて図1から図3に示した。これらの地図は,一般にタンポポ地図と呼ぶものである。今年度は,過去4年間の見かけのタンポポ地図(見かけ(外見)からタンポポを分類して作成した地図),真のタンポポ地図(雑種個体を除外して作成した地図),雑種性タンポポの地図(雑種性帰化タンポポと真の帰化タンポポから作成した地図)を比較し,その推移を見た。
図6 見かけのタンポポ地図 図7 真のタンポポ地図 図8 雑種のタンポポ地図
1) 地図の見方
� 仝�かけのタンポポ地図
見かけのタンポポ地図は,タンポポを採取した際に見かけ(外総苞片の反り返りと痩果の色)から判別したものに基づいて作成した地図である。この地図は,タンポポを分類する際,遺伝子の解析などの特殊な方法は用いない。市民運動や環境教育などで行われるタンポポ調査で作成される,従来どおりのタンポポ地図である。
色分けの基準としては,『ニホンタンポポ』に対し,セイヨウタンポポとアカミタンポポをひとまとめにした『見かけの帰化タンポポ』を比較して作成した。
図9にその凡例を示す。この地図では,
緑色に近づくほどニホンタンポポが多く,赤色に近づくほど帰化タンポポが多いことを示している。
 | 図9 見かけのタンポポ地図の凡例
見かけでニホンタンポポと判断された個体を で示してある。 |
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真のタンポポ地図は,遺伝子解析(酵素多型解析)の結果,雑種であると判断された個体を除き,純粋なニホンタンポポ,セイヨウタンポポ,アカミタンポポであると判断された個体の情報に基づいて作成したものである。
色分けの基準としては,『ニホンタンポポ』に対し,真のセイヨウタンポポと真のアカミタンポポをひとくくりにした『真の帰化タンポポ』を比較して作成した。
図10にその凡例を示す。この地図では,緑色に近づくほどニホンタンポポが多く,赤色に近づくほど真の帰化タンポポが多いことを示している。
 | 図10 真のタンポポ地図の凡例
遺伝子解析から真のアカミタンポポと判断された個体を で示してある。 |
�� 雑種のタンポポ地図
雑種のタンポポ地図は,遺伝子解析から雑種であると判断された個体と,真の帰化タンポポであると判断された個体に着目して作成した地図である。
色分けの基準としては,真アカミタンポポ,真セイヨウタンポポを『真の帰化タンポポ』とし,雑種のセイヨウタンポポ,雑種のアカミタンポポを『雑種性帰化タンポポ』として両者を比較して作成した。
図11にその凡例を示す。この地図では,黄色に近づくほど雑種化帰化タンポポが多く,赤色に近づくほど真の帰化タンポポが多いことを示している。
 | 図11 雑種のタンポポ地図の凡例
遺伝子解析の結果から雑種のアカミタンポポと判断された個体を で示してある。 |
2) 各種タンポポの分布の経年変化
� .縫曠鵐織鵐櫂�
地図右上(岡崎市役所付近の乙川と国道1号線に挟まれた地域)には生育は少ないが,2004年度及び2005年度には数個体採取されている。その他の調査区域には,ほぼ平均的に分布し,大きな経年変化はない。(グラフ)
�� 真のアカミタンポポ
2003年度,2004年度は地図右上のニホンタンポポがほとんど生育していない地域に分布している。2004年度以降は県道岡崎幸田線沿線沿いに生育範囲を拡大し,2005年度には調査区域全体に生育範囲を拡大した。2006年度は雑種化が進んだため,真のアカミタンポポの採取個体数が減った。(グラフ)
�� 雑種性アカミタンポポ
2003年度は,真のアカミタンポポとニホンタンポポの生育域が重なり合うところで,雑種性アカミタンポポ2個体を採取された。2004年度以降,雑種化はどんどん進行し,2006年度には,ほぼ調査地域全体に分布を広げた。(グラフ)
�� 雑種性セイヨウタンポポ
2003年度の調査時,既に雑種率100%であり,調査区域全体に生育がみられ,その後の分布に大きな経年変化はなかった。見かけのタンポポ地図や雑種性タンポポ地図では比較の対象となっているが,地図を見やすくするため,採取地点をプロットしなかった。(グラフ)
3) タンポポ地図の経年変化
�� 見かけのタンポポ地図
2003年度,2004年度にはニホンタンポポと見かけの帰化との「すみわけ」がある程度はっきりしているため,地図に,緑から赤までの色が見られる。2005年度以降は緑色の部分がほとんどなくなって中間色の橙が多くなっていることから,見かけの帰化タンポポが広がり,ニホンタンポポとの混在化が進んでいる。
�� 真のタンポポ地図
2003年度では,市役所付近に真のアカミタンポポが多いため地図の赤みが増している。県道岡崎・幸田線と国道248号線が交差するあたりは真のアカミタンポポが生育せず,雑種性セイヨウタンポポの効果が取り除かれるので,緑色が濃くなっている。2004年度では,県道岡崎・幸田線と国道248号線が交差するあたりに真のアカミタンポポが分布域を広げ,緑色の部分はやや中央下に移っている。なお,この地図がこの地区の自然環境を最もよく反映している。2005年度では見かけのタンポポ地図のところでも述べた理由(アカミタンポポの生育域の拡大)により緑色の部分が激減している。2006年度では緑色の部分が激増した。アカミタンポポの雑種化が一気に拡大し,真のアカミタンポポが採取された地点が減少したため,計算上,ニホンタンポポの生育域が拡大したかのような地図の着色結果になってしまっている。
�� 雑種性タンポポ地図
2003年度では,雑種個体が2個体採取されている。その後2004年度以降は,年々その分布が広がり,個体数も増加している傾向が見られる。地図右上の地域では次第に黄色に近づき,この地域での雑種化が進行しているということが見てとれる。
3.夏季休眠性の観察
校内に生育していたタンポポから無作為に選んだ47個体のタンポポの葉の枚数を毎日観察し,その変化を調査した。
それらの遺伝子解析(酵素多型と葉緑体DNA)を行った結果,ニホンタンポポ,雑種のアカミタンポポ,雑種のセイヨウタンポポ,雄核アカミタンポポの4種類,であることが分かった。
ニホンタンポポは,雨が多くなる梅雨頃から急激に葉の枚数が減少し,9月中旬から再び増加してきた。
雑種性アカミタンポポは,ニホンタンポポが休眠を開始した頃から葉の枚数の減少が始まったが,完全に葉が無くなるまでには至らなかった。
雑種性セイヨウタンポポは,枚数の変化は多様であり,休眠しているようにも見てとれる個体とそうでない個体の両方が見られた。全体としては,枚数の増減が雑種性アカミタンポポに比べて小さい個体が目立った。
真のアカミタンポポは,1個体だけであったが,葉の枚数の減少は見られず,夏季休眠性を持たないことが確認できた。
雄核のアカミタンポポは,核がアカミタンポポで,葉緑体はニホンタンポポである。これらは,葉が完全に無くなるまでには至らなかったが,葉の枚数の減少が見られた。
 | 図12 葉の枚数の推移 |
図13 アメダスグラフの凡例
(引用:Weathernews他)
考 察
1.タンポポ地図
1) 地図の信頼性
見かけのタンポポ地図と真のタンポポ地図を比較すると,2003年度,2004年度にはニホンタンポポと見かけの帰化タンポポとの「すみわけ」がはっきりしており,帰化タンポポの多い調査区域の右上が都市部,左下にいくにつれニホンタンポポが多くなるので自然環境豊かな地域と予想される。2004年度の真のタンポポ地図がこの地区の自然環境を最もよく反映している。2004年度までは,アカミタンポポの雑種化があまりみられず,生育域もニホンタンポポの生育域まで拡大していないため,ニホンタンポポとアカミタンポポ(痩果が赤いことでセイヨウタンポポと容易に判別可能)は環境指標生物としての役割を十分果たしていた。
ところが,2005年度以降,見かけのタンポポ地図では緑色の部分がほとんどなくなり調査区域で都市化が進んだ印象を受ける。しかし,実際は調査区域である学校周辺の環境はこの4年間では大きな変化はない。雑種のタンポポ地図より,アカミタンポポの生育域の拡大,特に雑種性アカミタンポポがニホンタンポポの生育域に侵入してきたことがわかり,その結果,見かけのタンポポ地図の緑色のメッシュが減り,橙色が増えたと考えられる。一方,2006年度は雑種化の影響で真のアカミタンポポの採取個体数が減ってしまった。ニホンタンポポの分布状態に大きな変化はないので,真のタンポポ地図の緑色の部分が極端に増えてしまった。以上を総合的に考えると,タンポポの環境指標生物としての役割やタンポポ地図の信頼性は失われてしまったといえる。
2) アカミタンポポの分布とその雑種率
都市部では地面がアスファルトやコンクリートに覆われて,降水は速やかに側溝へと排出され土壌に浸透する量は少ない。また,熱の発生源も多いので高温少雨となる。このため乾燥気候下で見られるように毛細管現象によって地下水が地表面に引き上げられて塩類が地表に集積しアルカリ性の土壌が形成される。もともとアカミタンポポは地中海沿岸などの乾燥気候下で生育していた種のため,このような都市部の環境に適応しやすい。(矢野,1988)調査区域内では右上(乙川と国道1号線に挟まれた地域)がこの環境にあてはまる。現に2003年度は集中的にアカミタンポポが確認されている。
2004年度には,県道岡崎幸田線沿いにも生育範囲を拡大し,ニホンタンポポの生育域を取り囲むようになった。2004年度,2005年度の雑種性タンポポ地図のアカミタンポポの雑種個体の分布を見ると,生育域が重なる地域で雑種個体が採取される傾向がみられる。ただし,雑種個体の増加は,雑種化したアカミタンポポが無性生殖により広がったものか,次々と雑種個体が誕生しているかはクローン解析をしないと判断はできない。
2006年度に至ってはアカミタンポポの雑種化およびその生育域の拡大は著しく,大阪府で行われた調査結果(アカミタンポポの雑種率がものの5年で大幅に上昇したという報告(渡邊,2001))とも一致する。
雑種化した帰化タンポポは,いずれもニホンタンポポの生育域に侵入してきている。これは,雑種化によりニホンタンポポの遺伝子を取り込むことで何らかの日本の環境に適応した生理的特性(生育に適したpHの変化や夏季休眠性の獲得(次の考察参照)など)を持つようになったのではないかと考えられる。
2.夏季休眠性
1) 遺伝子と休眠性
ニホンタンポポは,雨が多くなる梅雨頃から急激に葉の枚数が減少し,9月中旬から再び増加してきた。ニホンタンポポは夏季休眠性を持つと一般に言われていることから,枚数の変化を他種類のタンポポの夏季休眠性の有無を判断する基準とした。
雑種性アカミタンポポは,ニホンタンポポが休眠を開始した頃から葉の枚数の減少が始まったが,完全に葉が無くなるまでには至らなかった。しかし,夏季休眠性を持たない真のアカミタンポポと比べればその差は明らかであり,不完全ながら休眠をしているのではないかと考えられる。
雄核のアカミタンポポは,枚数の変化は少なく,雑種性アカミタンポポと同様に夏季も10枚程度葉を残していた。しかし,夏季休眠のような変化であったことは確かである。雄核のアカミタンポポの核は,夏季休眠性を持たない真のアカミタンポポ由来のものであり,葉緑体を含む細胞質はニホンタンポポ由来のものである。このことから,ニホンタンポポの細胞質,特に光合成を行う葉緑体が休眠に大きな影響を与えているのではないかと考えられる。
雑種性セイヨウタンポポは,枚数の変化は多様であり,休眠しているように思われる個体とそうでない個体の両方が見られた。全体としては,枚数の増減が雑種性アカミタンポポに比べて小さい個体が目立った様に思える。昨年の形態の調査では,雑種性セイヨウタンポポの形態がよりニホンタンポポに近い傾向を示したのに対し,休眠性に関してはアカミタンポポのほうがよりニホンタンポポに似た変化を示した。同じ雑種化でも,種類によってここまで性質の取り込み方の違いが見られるとは考えていなかったので,今回の結果は非常に興味深いものであった。
2) 外的要因と休眠性
夏季に休眠を引き起こす要因として,最高気温,最低気温,気温差,日照時間,降水量,日長変化(暗期),周囲の植物の変化などが考えられる。そこで,これらのデータと,休眠が見られた個体の葉の枚数の増減との関連性を探った。
その中で関連性が見られたのは,最高気温と日長変化であった。最高気温については葉の枚数が減り始める少し前から上昇し,葉が増え始める頃に再び下降していた。日長変化については,葉が再び増加してきた時期に特に大きな変化は見られないうえ(暗期が長くなり続けている),休眠中は地下部のみであって暗期を認識できるとは考えにくい。しかし,夏至の直後から葉の枚数変化がことから,休眠の開始のタイミングを測るのに関与しているように思われる。
最低気温や気温差,日照時間などは,休眠時期に変化が起きているが,どれも休眠に入った後の変化であり,直接的な要因になっているとは考えにくい。周囲の植物の変化については,その有無に関わらず休眠が開始されていることから,背の高い周囲の植物によってタンポポに当たる光量が減って休眠状態になるのではなく,タンポポ自身の遺伝的要因によって休眠が起こり,結果として光合成量の低下や呼吸量の増大によるエネルギーの浪費を防げるために生育に有利になっていると考えるのが妥当であろう。
以上の結果から,外的要因,特に最高気温と日長変化が休眠を起こす引き金となり,ニホンタンポポの細胞質によって休眠が起こっているのではないかと考えられる。
謝 辞
本調査・研究を進めるにあたって愛知教育大学生物学教室の渡邊幹男先生には,多大なご指導をいただきました。ここに謝意を表します。また,ご多忙な中,何度も実験手順,操作を懇切丁寧に教えてくださった同研究室の学生の方々,タンポポ地図作成ソフト「MeshWorker」を作成してくれたスーパーサイエンス部の先輩である古橋貞之氏(現 筑波大1年生)にも深く感謝いたします。
参 考 文 献
渡邊幹男・丸山由香里・芹沢俊介,1997a 東海地方西部における在来タンポポと帰化タンポポの交雑
(1)ニホンタンポポとセイヨウタンポポの雑種の出現頻度と形態的特徴 植物研究雑誌 72:51−57
渡邊幹男・丸山由香里・芹沢俊介,1997b 東海地方西部における在来タンポポと帰化タンポポの交雑
(2)ニホンタンポポとアカミタンポポの雑種の出現頻度と形態的特徴
渡邊幹男・小川美穂・内藤敬江・神崎護・下村英基・芹沢俊介,1997c 大阪府における雑種
タンポポの頻度と分布 関西自然保護機構:19(2):69−77
渡邊幹男 1997d 酵素多型で判別した雑種タンポポ−強奪種としてのタンポポ− 植生学会誌 21:43:47
渡邊幹男・榊原洋子・櫛田敏宏・神崎護・市川雅美・丸山由香里・内藤敬江・溝口忍・山倉夫
芹沢俊介 1998 加重平均法によるタンポポ地図の作成 植生学会誌15:147−150
渡邊幹男・来本麻世・花井隆晃・中川雅代・櫛田敏宏・伊東明・芹沢俊介
2001 大阪府堺市泉北ニュータウンにおける雑種性帰化タンポポの分布の変化1996年から5年後の追跡調査
野坂志朗・芹沢俊介 2002 春の野の花 愛知みどりの会 8−9
小川潔 2001 日本のタンポポとセイヨウタンポポ
矢野悟道編,1988 日本の植生 侵略と撹乱の生態学 159−169
岡崎高校 2003 愛知県岡崎市における帰化植物による遺伝子汚染の現状
−帰化タンポポの生き残り戦略−
岡崎高校 2004 遺伝子解析に基づく愛知県岡崎市のタンポポの分布域調査
−遺伝子雑種における形態と生育域の違い−
岡崎高校 2004 MeshWorker Version 1.2
A Smart Generator for Weighted Average Method Map
岡崎高校 2005 岡崎のタンポポの雑種化と形態の多様性
−遺伝子と形態の分析から−